用转导激酶检测试剂盒发现IRAK4抑制剂

Genentech利用转绿蛋白激酶分析试剂盒发现IRAK4抑制剂——IRAK也称为白介素-1受体相关激酶。在这个组中有四种不同的蛋白质，包括IRAK1、IRAK2、IRAK3和IRAK4。每一种都介导与MyD88及其相关的衔接蛋白的相互作用。IRAK1和IRAK4是具有激酶活性的活性酶，而IRAK3通常被认为是非活性的。IRAK2曾被认为是不活跃的，但研究表明其激酶活性对TLR信号传导至关重要上游toll样受体激活IRAK4，使IRAK1磷酸化。然后IRAK1通过其激酶活性自磷酸化并激活下游底物。这种级联反应导致MAPKs和NF-κB的激活以及促炎细胞因子的产生。2进一步的研究支持IRAK4作为天然免疫靶点。在这些研究中，IRKA1基因敲除小鼠在遭受“实验性自身免疫性脑脊髓炎”时很少或没有发生炎症。3还发现IRAK4突变的患者存在促炎细胞因子和抗炎细胞因子产生的问题。

提供治疗炎症性疾病的小分子药物。一些与IRAK4相关的疾病包括癌症、狼疮、炎症性肠病、关节炎和糖尿病

激酶检测试剂盒在药物发现中的应用

在最近发布的专利中，基因泰克讨论了如何使用转绿蛋白激酶分析试剂盒来测量酶活性和确定各种化合物的Ki值。总之，用合成的IRAK1肽作为底物来测试IRAK4的测定条件。样品孵育90分钟，ATP转化为ADP的目标值达到10%。分析的灵敏度允许研究人员使用低nM浓度的IRAK4（1.25nm）。IRAK1的活性也用前面讨论过的相同的合成肽底物来测定。10%转化率也用于起始ATP浓度为62.5μm的情况。然后在Tecan M1000平板阅读器上读取分析结果，随后对数据进行分析。举例说明了纳摩尔抑制剂。

在高通量筛选过程中，使用激酶分析试剂盒测量酶活性对于寻找新的抑制剂至关重要。分析必须足够可靠，以便在大屏幕上处理数小时，但必须足够准确，以提供具有良好灵敏度的可靠、可重复的数据。如基因泰克所示，后续的合成孔径雷达对于建立一套正确的化合物，从而在临床上进行治疗是必不可少的。当发现新的抑制剂并将其固化成铅时，像Transcreener这样的生化激酶分析试剂盒是一个关键的组成部分。IRAK4是一个引人注目的天然免疫靶点，临床试验如何揭示类风湿性关节炎等疾病的潜在治疗方法将是一个有趣的问题。

（1） 布莱恩，玛丽安C.德罗布尼克，乔伊戈比，阿尔贝托Katsumoto，Tamiko Rajapaksa，Naomi S.Kiefer Jr.，詹姆斯理查德。2020 IRAK4调制器Genentech，Inc.（南旧金山，加利福尼亚州，美国）美国专利：20200115388https://www.freetpatentsonline.com/y2020/0115388.html


（2） 李世云、阿斯特里德·斯特洛、伊丽莎白·J·方塔纳和霍尔格·韦斯奇。IRAK-4：具有IRAK激酶特性的IRAK家族新成员〉，《美国国家科学院学报》99，第8期（2002）：5567-5572。https://www.pnas.org/content/99/8/5567.short


（3） 弗兰纳里、西纳德和安德鲁·G·鲍伊。“白细胞介素-1受体相关激酶：先天免疫信号的关键调节因子”，《生化药理学》80，第12期（2010）：1981-1991。